結果計算:游離脯氨酸含量(μg·g-1)=(C×V)/(W×A×100)式中,C為從標準曲線上查得脯氨酸微克數;V為提取液總體積(mL);A為測定時加樣量(mL);W為樣品干質量(g)。
2結果與分析
2.1不同NaCl濃度脅迫對攀援衛矛和大葉黃楊葉片MDA含量的影響由圖1可看出,經NaCl不同濃度處理,對攀援衛矛和大葉黃楊葉片中MDA含量都有影響,表現為濃度越高MDA含量越大。其中1.5%的NaCl處理攀援衛矛為0.042μmol·g-1,大葉黃楊為0.066μmol·g-1,分別比CK增加了1.68倍、1.74倍;2.0%的攀援衛矛為0.049μmol·g-1,比CK增加了1.96倍;2.5%的NaCl處理對MDA含量影響最大,為CK的2.32倍;2.0%的大葉黃楊為0.071μmol·g-1,比CK增加了1.87倍;2.5%NaCl處理的MDA含量數值最大,為CK的2.18倍。對不同濃度NaCl脅迫下攀援衛矛MDA含量進行方差分析結果如表1。方差分析顯示,攀援衛矛在0.5%,1.0%的鹽處理下與CK相比,差異不顯著;1.5%處理差異顯著;2.0%,2.5%處理達到差異極顯著水平。由此可知,0.5%~1.0%鹽處理對攀援衛矛葉片生物膜損傷程度較輕;而1.5%以上的NaCl處理對葉片生物膜損傷程度比較重。大葉黃楊在0.5%,1.0%,1.5%的鹽處理下與CK相比,差異不顯著;2.0%處理差異顯著;2.5%處理達到差異極顯著水平。由此可知,1.5%以下鹽處理對大葉黃楊葉片細胞內的膜脂過氧化程度影響較輕;而1.5%以上的NaCl處理對葉片細胞內的膜脂過氧化程度加大,生物膜損傷程度比較重。2.2不同NaCl濃度脅迫對攀援衛矛和大葉黃楊脯氨酸葉片含量的影響圖2顯示,不同NaCl濃度處理對攀援衛矛和大葉黃楊脯氨酸含量都有影響,經過處理后的葉片脯氨酸含量逐漸增高,其中1.5%的攀援衛矛葉片含量為15.33μg·g-1,比CK增加了1.25倍,2.5%的18.01μg·g-1,為CK的1.46倍;大葉黃楊的2.0%為13.98μg·g-1,為CK的1.39倍,2.5%的NaCl處理對MDA含量影響最大,是CK的1.50倍。對不同濃度NaCl脅迫下攀援衛矛葉片脯氨酸含量進行方差分析結果見表2。方差分析顯示,攀援衛矛在不同NaCl處理下,0.5%、1.0%與CK相比,差異不顯著;1.5%、2.0%、2.5%的NaCl處理達到差異極顯著水平。由此可知,在濃度1.0%以下鹽處理攀援衛矛葉片可通過自身調節作用積累一定的脯氨酸質,有效降低體內的滲透勢,維持細胞的膨壓,增強抗鹽能力正常生長,1.5%以上生長則受到嚴重影響。大葉黃楊在0.5%、1.0%、1.5%的鹽處理下,與CK相比差異不顯著;2.0%差異顯著;2.5%達到差異極顯著水平。由此可知,當脅迫濃度上升時,葉片內的游離脯氨酸含量呈逐漸上升趨勢,說明植物在鹽脅迫條件下,體內靠積累脯氨酸來抵御逆境對它的傷害,當濃度達到2.5%時,游離脯氨酸含量的增長超出了合理值。3結論與討論(1)細胞膜是植物細胞與外界聯系的第一道防線,它的穩定性直接影響到植物細胞的代謝功能。研究表明:植物受到逆境脅迫時,膜質過氧化加劇,大量生成MDA,使膜透性增大[9-10]。所以通過測定MDA含量的變化,可反映植物細胞發生膜質過氧化的劇烈程度和植物對逆境條件反應的強弱。本試驗數據顯示,隨著NaCl濃度加大,攀援衛矛葉片中MDA含量逐漸升高,經方差分析可知,1.5%濃度的NaCl處理差異顯著;2.0%、2.5%的NaCl處理達到差異極顯著水平。說明1.5%以下鹽濃度處理對攀援衛矛葉片生物膜基本沒有損傷;而1.5%以上的處理對葉片生物膜則有較強傷害。大葉黃楊在濃度為2.0%的鹽溶液處理下差異顯著;2.5%的NaCl處理達到差異極顯著水平。表明2.0%以下鹽處理對大葉黃楊葉片細胞內的膜脂過氧化有輕度損傷;而2.0%以上的NaCl處理對葉片細胞內的膜脂過氧化程度加大,生物膜損傷程度嚴重。(2)脯氨酸是植物高蛋白組分之一,起滲透調節作用,游離狀態存在于植物體中,在正常環境條件下,植物體內游離脯氨酸含量很低,而植物遇到逆境脅迫時,植物體內游離脯氨酸含量增加可以保護細胞質內許多酶免受傷害,這是植物一種很有效的自我保護機制[13-14]。由試驗結果可知,經1.0%以下鹽濃度處理,攀援衛矛通過自身調節作用積累一定的脯氨酸,有效降低了體內的滲透勢,維持細胞的膨壓,增強抗鹽能力,1.5%以上處理生長變衰;大葉黃楊在1.5%以下的鹽處理能正常生長;2.0%處理則生長受到影響,當2.5%的NaCl處理時,游離脯氨酸含量達到最大值,生長受到抑制。可見,攀援衛矛和大葉黃楊在鹽脅迫時有一定的自我調節能力。本試驗在不同濃度鹽脅迫下,測定了攀援衛矛和大葉黃楊葉片中的MDA含量和脯氨酸含量,發現大葉黃楊在2.0%以下濃度脅迫生長良好,2.0%以上顯示出長勢衰弱;而攀援衛矛則在1.5%濃度時就表現出長勢衰弱,所以認為大葉黃楊在鹽堿地生長的適應范圍比攀援衛矛更廣,抗鹽性更強。
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